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网络发布日期:2018-03-23
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中文摘要: 目的:探讨RNA干扰骨肉瘤中抗增殖蛋白(prohibitin)基因的表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:收集2013年6月至2014年8月行骨肉瘤穿刺和活检存档的骨肉瘤及相应瘤旁组织的蜡块标本共40例,提取骨肉瘤及相应瘤旁组织中的总RNA及总蛋白,应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测prohibitin基因的mRNA和蛋白表达;阴性对照小干扰RNA(NC-siRNA)组和RNA干扰(prohibitin-siRNA)组转染MG63细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组;转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western blot检测各组细胞中prohibitin的蛋白表达以及增殖细胞核抗原(PCNA)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达;CCK8实验检测并计算细胞增殖率;采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:患者骨肉瘤组织中prohibitin的mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于瘤旁组织(P均<0.01)。与空白对照组及NC-siRNA组比较,在RNA干扰组转染prohibitin-siRNA后MG63细胞的prohibitin蛋白相对表达量显著降低(P均<0.01);RNA干扰组细胞存活率及Ki67、PCNA、PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P均<0.01),细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高(P均<0.01)。结论:RNA干扰沉默prohibitin的表达可显著降低骨肉瘤细胞的增殖活力,并诱导细胞凋亡,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。
Abstract:
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文章编号: 中图分类号:R738.1 文献标志码:
基金项目:山东省卫生厅科研计划项目(2013WS2416)
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李强,赵永生,陈修福,张承韶.RNA干扰骨肉瘤中抗增殖蛋白基因的表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响[J].中国临床研究,2017,30(10):1301-1305.
李强,赵永生,陈修福,张承韶.RNA干扰骨肉瘤中抗增殖蛋白基因的表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响[J].中国临床研究,2017,30(10):1301-1305.