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Published Online:March 23, 2018
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中文摘要: 目的:探讨RNA干扰骨肉瘤中抗增殖蛋白(prohibitin)基因的表达对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:收集2013年6月至2014年8月行骨肉瘤穿刺和活检存档的骨肉瘤及相应瘤旁组织的蜡块标本共40例,提取骨肉瘤及相应瘤旁组织中的总RNA及总蛋白,应用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测prohibitin基因的mRNA和蛋白表达;阴性对照小干扰RNA(NC-siRNA)组和RNA干扰(prohibitin-siRNA)组转染MG63细胞,不经任何处理的细胞作为空白对照组;转染48 h后提取细胞中的蛋白,Western blot检测各组细胞中prohibitin的蛋白表达以及增殖细胞核抗原(PCNA)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved caspase-3)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达;CCK8实验检测并计算细胞增殖率;采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:患者骨肉瘤组织中prohibitin的mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于瘤旁组织(P均<0.01)。与空白对照组及NC-siRNA组比较,在RNA干扰组转染prohibitin-siRNA后MG63细胞的prohibitin蛋白相对表达量显著降低(P均<0.01);RNA干扰组细胞存活率及Ki67、PCNA、PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P均<0.01),细胞凋亡率及Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高(P均<0.01)。结论:RNA干扰沉默prohibitin的表达可显著降低骨肉瘤细胞的增殖活力,并诱导细胞凋亡,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。
Abstract:
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文章编号: 中图分类号:R738.1 文献标志码:
基金项目:山东省卫生厅科研计划项目(2013WS2416)
Author Name | Affiliation |
李强,赵永生,陈修福,张承韶 | 青岛市市立医院脊柱外科,山东 青岛 266011 |
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李强,赵永生,陈修福,张承韶 | 青岛市市立医院脊柱外科,山东 青岛 266011 |
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